HPLC Säulenkonfigurator

HPLC-Säulen für jede Anwendung

Hier können Sie aus mehr als 80.000 HPLC-Säulen von mehr als 25 verschiedenen Herstellern die richtige Säule finden. Vergleichen Sie dazu auch die Preise und Anwendungsmöglichkeiten der verschiedenen Hersteller. Wir führen Säulen aller großen Hersteller wie Agilent, Macherey-Nagel oder Merck Millipore. Eine qualitativ gleichwertige und preiswertere Alternative bieten wir mit unserer Eigenmarke Altmann HLPC-Säulen. Tipps & Tricks zur Wahl der geeigneten Säule finden Sie auch unter www.hplc-saeule.de. Sollten Sie nicht die richtige Säule finden, kontaktieren Sie uns gerne.

NP-Säulen für die Normalphasen-Chromatographie

Vor der Entwicklung der Umkehrphasen (Reversed Phase, RP) war die Normalphasenchromatographie (engl.: Normal Phase Chromatography) die verbreiteteste Trennmethode. Deshalb werden Normal Phase (NP) HPLC-Säulen von allen bekannten Herstellern angeboten und können hier gefunden werden.

Bei Normalphasenchromatographie wird die Wechselwirkung von Analyten mit polaren funktionellen Gruppen auf der Oberfläche der stationären Phase ausgenutzt. Diese Wechselwirkung ist bei Nutzung von unpolaren Lösungsmitteln als mobile Phase am stärksten. Die Normalphasenchromatographie ist eine sehr leistungsfähige Trennmethode, da eine große Auswahl an Lösungsmitteln benutzt werden kann, um die Selektivität einer Trennung genau abzustimmen. Bei vielen Chromatographieanwendern hat sie allerdings wegen ihrer Komplexität an Beliebtheit verloren.

Unter bestimmten Bedingungen können lange Äquilibrierungszeiten oder Probleme mit der Reproduzierbarkeit auftreten, deren Hauptgrund die Empfindlichkeit der Technik gegenüber niedrigen Konzentrationen polarer Kontaminanten in der mobilen Phase ist. Wenn diese Probleme beherrscht werden, liefert die Technik normalerweise bessere Chromatogramme als Umkehrphasen-Methoden, da die üblicherweise verwendeten Lösungsmittel eine niedrigere Viskosität besitzen.
Bei der Normalphasen-HPLC ist die mobile Phase nicht polar und die stationäre Phase polar. Normalphasen sind Kieselgele oder Aluminiumoxide, an denen reine Adsorptionsvorgänge an den polaren OH-Gruppen zur Trennung ausgenutzt werden. Das wesentliche Trennprinzip beruht somit auf der unterschiedlich starken Adsorption der Analytmoleküle an die Oberfläche einer stationären Phase (häufig Kieselgele).

HPLC-Säulen für die Reversed Phase (RP)-Chromatographie

Bei den Umkehrphasen (reversed phase, RP) sind die Polaritätsverhältnisse im Vergleich zu den Normalphasen "umgekehrt": Die mobile Phase ist polar und die stationäre Phase nicht polar. Als eines der verbreitetsten chromatographsichen Trennverfahren stellen alle bekannten Hersteller entsprechnde Produkte dem Anwender zur Verfügung.

Die unpolaren Seitenketten in Reversed Phase Chromatographiesäulen sind entweder an ein Polymer oder an ein Gerüst aus Kieselgel gebunden, was dazu führt, dass sie sich hydrophob verhalten. Je länger die Kette wird, desto unpolarer werden auch die Phasen. So sind die Analyten nur hydrophoben Wechselwirkungen ausgesetzt. Polare Analyten werden zuerst aus der Säule eluiert, gefolgt von den nicht polaren Analyten. Umkehrphasen werden heute weit häufiger eingesetzt als Normalphasen, da sie universell für polare und unpolare Analyten einsetzbar sind. Zudem ist diese Methode sehr empfindlich und flexibel, da kleine Änderungen der Zusammensetzung der mobilen Phase (z. B. Salze, pH, organische Lösungsmittel) oder der Temperatur die Trenneigenschaften des Systems völlig ändern. Besonders auch in Verbindung mit UV-Spektroskopie (LC-UV) wird RP-HPLC für zahlreiche Anwendungen verwendet.

Chirale Säulen für chirale/enantiomere Chromatographie

Mit Hilfe der chiralen bzw. enantiomere HPLC kann im Gegensatz zur normalen HPLC auch die Trennung und Bestimmung von chiralen Verbindungen durchgeführt werden. Dafür werden spezielle chirale stationäre Phasen benötigt, welche fixierte chirale Funktionalitäten aufweisen. Im Analytics-Shop finden Sie über 1.400 verschiedene chirale Säulen unterschiedlicher Hersteller, darunter die hochwertigen Säulen von Chiral Technologies sowie günstigere, gleichwertige Alternativen von YMC und unserer Hausmarke Altmann Analytik.

Zum Trennen von chiralen Verbindungen werden spezielle Säulen benötigt - hier kommen chirale bzw. enantiomere HPLC-Säulen zum Einsazt. Diese ermöglichen bei geeigneter Wechselwirkung die Trennung der in nahezu allen physikalischen und chemischen Eigenschaften gleichen Enantiomere. Enatiomere liegen vor, wenn ein Molekül ein chirales Zentrum besitzt. Liegen zwei oder mehr chirale Zentren vor, können auch Diastereomere gebildet werden. Diese unterscheiden sich in ihren Eigenschaften und können mittels Chromatographie getrennt werden. Die Trennung von Enantiomeren beruht also auf der Bildung von Diastereomeren und und deren Trennung durch chirale stationäre Phasen (z. B. Kieselgele). Als Elutionsmittel wird ein herkömmliches Solvens verwendet.

UHPLC- und UPLC^®-Säulen

Mit der Ultra High Performance Liquid Chromatography (UHPLC) können die Leistungen der HPLC noch einmal stark verbessert werden. Hier werden kurze und dünne Säulen eingesetzt. Der Durchmesser der Partikel des Füllmaterials liegt bei 2µm und weniger, wodurch eine höhere Trennleistung als bei der Standard-HPLC erreicht wird. Die vergrößerte Gesamtoberfläche des Füllmaterials bietet dem Analyten mehr Raum zur Adsorption. Durch die kürzeren Säulen verringern sich die Analysenzeiten und damit auch die benötigten Lösemittelmengen.

Säulen für hydrophile Interaktionschromatographie (HILIC)

Die hydrophile Interaktionschromatographie (HILIC) ist eine beliebte Alternative zur Normalphasen- und Umkehrphasen-Chromatographie. Analog zur NP werden in der HILIC Methode stationäre Phasen verwendet, jedoch mit Puffersystemen, die identisch zur RP Chromatographie sind. Hierbei handelt es sich um wässrige Puffersysteme mit organischem Modifier, z. B. Acetonitril. In der HILIC Methode ist Wasser das stärkste Elutionsmittel. Eine HILIC Säule eignet sich zur Trennung polarer Substanzen, von Kohlenhydraten sowie von polaren und hydrophilen Verbindungen unabhängig von Ladung und Molekülgröße. Beachten Sie insbesondere das enorm umfangreiche Angebot von HILIC-Säulen des Qualitätsherstellers YMC.

Überkritische Fluid Chromatographie Säulen (Supercritical Fluid Chromatography, SFC)

Wir bieten Ihnen auch Säulen für Anwendungen in der überkritischen Flüssigkeitschromatographie (SFC). Wesentliche Vorteile überkritischer Flüssigkeitschromatographie gegenüber HPLC:

• Kostengünstig: reduzierter Lösungsmittelverbrauch
• Umweltfreundlich
• Zeitsparend: schnelle Trennung mit hoher Auflösung
• Flexibel: chirale und achirale Phasen

Der Vorteil der SFC gegenüber der HPLC liegt unter anderem darin, daß die empfindlichen Nachweismöglichkeiten der Gaschromatographie(GC) genutzt werden können. Die physikalischen Eigenschaften der Eluenten wie Dichte, Viskosität und Diffusionskoeffizienten liegen zwischen denen von Gasen und Flüssigkeiten. In den meisten Fällen wird überkritisches Kohlendioxid als Fluid eingesetzt. Die niedrige Viskosität von überkritischem Kohlendioxid ermöglicht analytische Trennungen, die 3-5-mal schneller als diejenigen die für die Normalphasen-HPLC sind. Die Geschwindigkeit der SFC-Trennungen, die Konservierung von organischen Lösungsmitteln und konzentriertere Produktfraktionen machen SFC zu einer wünschenswerten präparativen chromatographischen Technik zur Reinigung chemischer Mischungen.

SFC ist eine umweltfreundliche Trenntechnik, die Verwendung von CO2-basierten mobilen Phasen ermöglicht. Die Verwendung von Hochleistungs-präparativen Säulen (10 - 50 mm Innendurchmesser) mit einer Vielzahl von Partikelgrößen von 3 - 20 μm und führt zur schnellen Trennung und Rückgewinnung gereinigter Komponenten.

Nano HPLC-Säulen

Im Vergleich zu herkömmlichen HPLC-Säulen setzt die Nano-HPLC auf Säulen mit einem sehr kleinen Innendurchmesser. Standardmäßig werden unter anderem Säulen mit 75 µm, 100 µm oder 150 µm eingesetzt. Eine Verringerung des Innendurchmessers hat zur Folge, dass die Einspritz- und Durchflussmengen ebenso verkleinert werden müssen. Das ist gerade dann vorteilhaft, wenn nur kleine oder verdünnte Probenmengen zur Verfügung stehen. Die geringere Größe der Nano-HPLC führt zu einer erhöhten Empfindlichkeit bei geringerem Lösemittelverbrauch. Nano-Säulen haben die Fähigkeit, die Probenkonzentration hochzuhalten und ca. 40-50 % der Probe zum Detektor zu leiten. Die Trenneffizienz gegenüber der traditionellen HPLC-Technologie ist bei der Nano-HPLC vergleichsweise hoch.

Säulen für die GPC & SEC

Die Gel-Permeation (GPC/SEC) eignet sich besonders gut für die Trennung unpolarer Moleküle und kann für eine große Bandbreite an Lösungen angewandt werden, von unpolaren organischen bis hin zu wässrigen Anwendungen. GPC/SEC Säulen sind mit sehr kleinen, runden und porösen Partikeln gepackt. Die Packung ist hydrophob. Die Trennung der Moleküle erfolgt bei der GPC/SEC nach der Größe (Größenausschlusschromatographie). Große Moleküle verlassen vor kleinen Molekülen die Säule. Die ersten Säulen waren mit gel-artigen Materialien gepackt, deshalb die Bezeichnung Gel-Permeation.

Ionenaustausch-Chromatographie (IEC)

Bei der Ionenaustausch-Chromatographie (Ion Exchange Chromatography, IEC) bestimmen die Nettoladung und die Ladungsverteilung auf der Oberfläche eines Proteins die Wechselwirkung des Proteins mit den geladenen Gruppen auf der Oberfläche des Packungsmaterials. Die Oberflächenladungen von Protein und Packungsmaterial müssen entgegengesetzt sein, damit eine Interaktion stattfinden kann.

Die manipulierbaren Variablen, wie der pH-Wert des Puffers, die Pufferzusammensetzung, die Steigung des Gradienten und das Salz, mit dem der Gradient aufgebaut wird, ermöglichen eine große Auswahl an Möglichkeiten zur Optimierung einer Trennung. Bei jedem pH-Wert hat ein Protein aufgrund des Ladungszustands der Aminosäuren eine positive oder negative Nettoladung. Dementsprechend wird dieses Protein - sofern selbst positiv geladen - entweder an negativ geladene Materialien oder andernfalls an positiv geladene Materialien binden. Die Trennung erfolgt im wesentlichen nach Ladung und Größe der Ionen.

Als Materialien für die Gelmatrix werden Harze wie Polystyrol, Cellulose und vernetzte Polyacrylamid- oder Polydextran-Gele verwendet. Es wird dabei nach starken und schwachen Anionen- oder Kationenaustauschern unterschieden. Normalerweise wird Ionenaustauschchromatographie bei pH-Werten durchgeführt, die das Protein in seiner aktiven Konformation belassen.

Säulen mit polar gebundenen Phasen

Polar gebundene Phasen basieren auf Kieselgelen, an denen Ketten gebunden sind, die funktionelle Gruppen tragen. Dadurch sind die Trennphasen in verschiedenen Graden polar. Die Trennung erfolgt durch unterschiedliche Mechanismen und oft als Folge der Kombination mehrerer Effekte, wie z. B. Adsorption, Verteilung, Ionenaustausch, Molekülgrößenausschluss etc.

Zulässige Änderungen nach amerikanischem Arzneibuch (United States Pharmacopeia, USP)

Die U.S. Pharmacopeia Convention ist ein wissenschaftliches Non-Profit Unternehmen, das die Standards für Inhaltsstoffe, Konzentration, Qualität und  Reinheit von Arzneimitteln, Lebensmittelzutaten und Nahrungsergänzungsmitteln setzt, die weltweit hergestellt, vertrieben und verbraucht werden. Gemäß USP-Vorschrift kann es folgende Abweichungen geben:

USP Chapter

1. Säulenlänge:  ± 70 %
2. Säulen Innendurchmesser: kann geändert werden, wenn die Durchflussgeschwindigkeit konstant gehalten wird.
3. Partikelgröße: - 50 %
4. Durchflussrate: ± 50 %
5. Verhältnis der Komponenten in mobiler Phase: ± 30 % (relativ für kleinere) oder ± 10 %
6. pH-Wert der mobilen Phase: ± 0,2
7. Salzkonzentration im Puffer: ± 10 %
8. Säulentemperatur: ± 10° C
9. Wellenlänge des UV-Vis Detektors:  ± 3 nm
10. Injektionsvolumen: Kann so lange reduziert werden bis Präzision- und Nachweisgrenzen erreicht sind.

Zulässige Änderungen nach europäischem Arzneibuch (European Pharmacopoeia, EP)

European Pharmacopoeia Ph. Eur., Chapter 2.2.46

Das europäische Arzneibuch ist eine veröffentlichte Sammlung von Monografien, welche die individuellen und allgemeinen Qualitätsstandards von Inhaltsstoffen, Dosierungen und Analysemethoden der Medizin beschreiben. Ziel ist es, gemeinsame Qualitätsstandards in ganz Europa festzulegen, um die Qualität von Arzneimitteln und andere chemische Produkten zu kontrollieren. Gemäß EP-Vorschrift kann es folgende Abweichungen geben:

Isokratische Elution

1. Säulenlänge:  ± 70 %
2. Säulen Innendurchmesser:  ± 25 %
3. Partikelgröße: - 50 %
4. Durchflussrate: ± 50 %
5. Verhältnis der Komponenten in mobiler Phase: ± 30 % (relativ für größere) oder ± 2 % absolut
6. pH-Wert der mobilen Phase: ± 0,2
7. Salzkonzentrationen im Puffer: ± 10 %
8. Säulentemperatur: ± 10° C
9. Wellenlänge des Detektors:  ± 3 nm
10. Injektionsvolumen:  Kann so lange reduziert werden bis Präzision- und Nachweisgrenzen erreicht sind.  

Gradientenelution

1. Säulenlänge:  ± 70 %
2. Säulen Innendurchmesser:  ± 25 %
3. Partikelgröße: keine Änderung erlaubt
4. Durchflussrate: Änderung ist akzeptabel, wenn Säulengröße verändert wird
5. Verhältnis der Komponenten in mobiler Phase und (Dichte-)Gradient: kleine Änderungen der Zusammensetzung der mobilen Phase und dem (Dichte-)Gradient sind akzeptabel, wenn die Systemeignung noch den Anforderungen entspricht.
6. Dwell-Volumen: Gradientenzeitpunkte können verwendet werden, um Unterschiede im dwell-Volumen zwischen verschiedenen Systemen auszugleichen.
7. pH-Wert in mobiler Phase: keine Änderung erlaubt
8. Salzkonzentration im Puffer: keine Änderung erlaubt
9. Säulentemperatur: ± 5° C
10. Wellenlänge des Detektors: keine Abweichungen erlaubt

Injektionsvolumen:  Kann so lange reduziert werden bis Präzision- und Nachweisgrenzen erreicht sind.

HPLC-Säulenempfehlungen nach USP